Anaerobik Gut Funguslarının Uzun Süreli Muhafazalarında Agarlı Besi Yerlerinin ve Ön Soğutma İşleminin Etkinliğinin Araştırılması
Öz
Amaç: Anaerobik gut funguslarının (AGF) kültüre alınması ve uzun süreli muhafazası özellikle aerobik mikroorganizmalar ve prokaryotik gut mikrobiyom ile karşılaştırıldıklarında göreceli olarak düşük verimlidir. Anaerobik koşullar altında yapılan bu muhafaza işleminde hücre yapılarının düşük sıcaklıklarda uzun süreli korunması amacıyla gliserol, dimetil sülfoksit (DMSO), kan serumu, polivinilpirolidon (PVP) ve sorbitol gibi kriyoprotektanlar kullanılır.
Materyal ve Metot: Bu çalışmada farklı enerji kaynakları (buğday samanı, sükroz, dekstroz, ksiloz ve glikoz) kullanılarak dağ keçisi dışkısından izolasyonu ve saflaştırılması yapılan Caecomyces GMLF77 izolatı ile kültür koleksiyonundan temin edilen Orpinomyces GMLF18 izolatı 6 aylık süreyle eğik agar ve Roll tüp agar besi yerlerinde farklı sıcaklık kombinasyonlarında muhafaza edilmiş ve izolatların yaşama oranları analiz edilmiştir.
Bulgular: Caecomyces GMLF77 izolatı en yüksek yaşama oranını (%67) ksiloz içeren eğik agar içerisinde %15 gliserol varlığında doğrudan –196 °C’de (sıvı azot) muhafazaya alındığında göstermiştir. Orpinomyces GMLF18 ise glikoz içeren eğik agarlı besi yerinde, 6 aylık süreyle ön soğutmasız –196 °C’de muhafazasında %83 yaşama oranı göstermiştir. Diğer taraftan her iki izolat da kullanılan tüm besi yeri ve enerji kaynaklarında 4 °C’de ön soğutmaya tabi tutulduklarında yaşama şansı bulamamışlardır.
Sonuç: Sonuçlar fungal izolatların sıvı azota aktarılmadan önce ön soğutma işlemine tabi tutulmalarının uzun süreli yaşama oranlarının artırılmasına önemli bir katkı sağlamadığını ortaya koymuştur.
Anahtar Kelimeler
Agar, anaerobik gut fungus, kriyoprotektan, mikrobiyal muhafaza, sıvı azot
Destekleyen Kurum
Kahramanmaraş Sütcü İmam Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri
Proje Numarası
(2021-6-17D)
Teşekkür
Bu çalışma kısmi olarak Kahramanmaraş Sütçü İmam Üniversitesi, Bilimsel Araştırma Projeleri birimince maddi olarak desteklemesinden dolayı teşekkür ederiz.
Kaynakça
- Akyol I, Comlekcioglu U, Kar B, Ekinci M, Ozkose E. 2009. Cloning of a xylanase gene xyn2A from rumen fungus Neocallimastix sp. GMLF2 in Escherichia coli and its partial characterization. Biologia, 64(4), 664-670.
- Atanasova-Pancevska N, Kungulovski D. 2018. Fermentative activity of five strains of N. frontalis cultivated on a different substrates. Macedonian Journal of Animal Science, 8(1), 33-40.
- Brookman JL, Ozkose E, Rogers S, Trinci AP, Theodorou MK. 2000. Identification of spores in the polycentric anaerobic gut fungi which enhance their ability to survive. FEMS Microbiology Ecology, 31(3), 261-267.
- Campbell NC, Field J, MacKechnie K, Saxon RJ, Menéndez CR. 2020. Cryopreservation to sustain long term maintenance of algae and protozoa in the culture collection of algae and protozoa (CCAP). Cryobiology, 97, 279.
- Chen YC, Tsai SD, Cheng HL, 2007. Caecomyces sympodialis sp. nov., a new rumen fungus isolated from Bos indicus. Mycologia, 99(1): 125-130.
- Chetverikova EP. 2009. The problem of stability of organisms after cryopreservation (fungi as example). Biophysics, 54(5), 626-630.
- Clark CG, Stensvold CR. 2016. Blastocystis: isolation, xenic cultivation, and cryopreservation. Current Protocols in Microbiology, 43(1), 20A-1.
- Comlekcioglu U, Akyol I, Ozkose E, Kar B, Ekinci MS. 2008. Carboxymethylcellulase production by the anaerobic rumen fungus Neocallimastix sp. GMLF7. Annals of Microbiology, 58 (1) 115-119.
- Davies, D.R., Theodorou, M.K., Lawrence, M.I. and Trinci, A.P.J. 1993. Distrubution of anaerobic fungi in the digestive tract of cattle and their survival in faeces. J. Gen. Microbiol. 139: 1395-1400.
- Ekinci MS, Özköse E, Akyol İ. 2006. Effects of sequential sub-culturing on the survival and enzyme activity of Neocallimastix hurleyensis. Turkish Journal of Biology, 30(3), 157-162.