Sığır brusellozunun teşhisi için sütte indirekt ELISA’nın kullanımının değerlendirilmesi

Yıl 2020, Cilt: 9 Sayı: 1, 36 - 41, 25.06.2020

İbrahim Çadırcı Sevil Erdenliğ Gürbilek

https://doi.org/10.31196/huvfd.688627

Öz

Bu çalışmada sütte anti Brucella antikorlarını saptamak için bir indirekt süt ELISA prototipi geliştirilmesi amaçlandı. Daha önce Brucella abortus biyotip 3 izole edilen enfekte çiftliklerden alınarak Rose Bengal Pleyt testi (RBPT) ve komplement fiksasyon testi (KFT) ile test edilerek pozitif bulunan toplam 36 süt ve serum örneği ve brucella ari sürülerden alınan 45 adet süt ve serum örnekleri tanısal duyarlılık ve özgüllüğün saptanmasında receiver-operating characteristic (ROC) ile analiz edildiler. Bu analizin sonucunda yüzde pozitivite (PP) olarak ifade edilen eşik değeri değeri, %29.3 olarak alınmıştır. Buna göre testin duyarlılığı (sensitivite) %96.15 [%95 (güven eşiğindeki sınırlar (%80.36-99.9)] ve özgüllük (spesifisite) %95.65 [%95 (güven eşiğindeki sınırlar (%85.16-99.47)] olarak saptandı. Sonuçlar, aynı hayvandan alınan süt ve serum sonuçları arasında korelasyon gösterdi. Süt ring testi (SRT), KFT ve RBPT sonuçlarına göre en yüksek oranda yanlış pozitif sonuç veren test oldu. Çalışmanın sonunda elde etdilen bulgular, indirekt süt ELISA prototipinin oldukça duyarlı ve özgül bir test olduğunu ve sütün mevcut olduğu durumlarda, hastalığın serolojik tanısı için süt sığırlarında stress yaratmadan kullanılabileceğini ortaya koymuştur. Dolayısı ile süt örneklerinde ELISA’nın kullanımı ile süt sığırcılığı işletmelerinde bruselloz ile ilgili güvenilir ve sağlam veriler, ekonomik ve pratik olarak elde edilebilecektir.

Anahtar Kelimeler

Brucella abortus, süt-ELISA, Sığır, SRT

Destekleyen Kurum

Harran Üniversitesi BAP

Kaynakça

• Alton GG, Jones LM, Angus RD, Verger JM, 1988:Bacteriological methods. In: “Techniques the Brucellosis Laboratory”. INRA, Paris, FRANCE.
• Biancifiori F, Nannini D, Di Matteo A, Belfiore P, 1996: Assesment of an Indirekt ELISA in milk for the diagnosis of ovine brucellosis. Com Immun Microbiol Infect Dis,19(1),17-24
• Broker DK, Stinebring WR, and Kunkel JR, 1981: BrucELISA: an Enzyme-Antibody Immunoassay for detection of Brucella abortus Antibodies in milk: Correlation with the Brucella Ring Test and with Shedding of Viable Organism. J Clin Microbiol, 14(4):1981;14(4), 396-403.
• Chand P, Rajpurohit BS, Malhotra AK, Poonia JS, 2005: Comparison of milk-ELISA and serum-ELISA for the diagnosis of Brucella melitensis infection in sheep. Vet Microbiol, 108(3-4), 305-11.
• Corbel MJ, 1989: Microbiology of the genus Brucella. In “ Brusellosis: Clinical and Laboratory Aspects”, Ed;Young EJ, Corbel MJ, CRC Press, Inc., Boca Raton,USA
• Ducrotoy MJ, Conde-Alvarez R, Blasco JM, Moriyon I, 2016: A review of the basis of the immunological diagnosis of ruminant brucellosis. Veterinary Immunology and Immunopathology , 171, 81-102.
• Kenyon AJ, and Jenness R, 1958: Effects of proteins on agglutination of fat globules. J.Dairy Sci,41, 716.
• Kerkhofs P, Botton Y, Thiange P, Dekeyser P, Limet N, 1990: Diagnosis of Bovine Brucellosis by Enzyme Immunoassay of milk. Vet. Microbiol, 24, 73-80 .
• Nicoletti P,1969: Further evaluation of serologic tes procedures used to diagnose brucellosis. Am J Ve. Res, 30, 1811-1816.
• Nielsen K, Smith P, Gall D, Perez B, Cosmos C, Mueller P, Trottier J, Cote, G, Boag L, Bosse J, 1996: Development and validatian of an indirect enzyme immunoassay for detection of antibody to Brucella abortus in milk. Vet. Microbiol., 52(1-2),165-173.
• OIE, 2009: Manual of Standards for Diagnostic tests and Vaccines. Bovine Brucellosis chapter (2.4.3).Third edition, Office International of Epizooties, Paris, France
• Romero C, Pardo M, Grillo MS, Diaz R, 1995:' Evaluation of PCR and Indrect Enzyme Linked Imminosorbent Assay on Milk Samples For Diagnosis of Brucellosis in Dairy Cattle. Journal of Clinical Microbiology, 33, 3.
• Schoonjans F, Zalata A, Depuydt C, Comhaire F, 1995: MedCalc: A new computer program for medical statistics. Comput. Methods Programs Biomed, 48, 257-262
• Sutra L, Caffin JP, Dupray G, 1986:Role of Milk immunoglobulins in the Brucella milk ring test. Vet Microbiol, 12, 359-366.
• Titarelli M, Bonfini B, De Massis F, Giovannini A and Scacchia M,2011: Standardisation of an indirect enzyme-linked immunosorbent assay fort he detection of brucella antibodies in milk from water buffalo (Bubalus bubalis) in Italy. Veterinaria Italiana, 47(1), 59-64.
• Thoen CO, Pietz DE, Armbrust AL and Harrington, R, 1979. Enzyme Immunoassay for Detecting Brucella antibodies in Cow’s Milk. J Clin Microbiol ,10(2),222- 225.
• Vanzini VR, Aguirre N, Lugaresi CI, de Echaide ST, De Canavesia VG, Guglielmone AA, Marchesino MD, Nielsen K, 1998: Evaluation of an direct ELISA for the diagnosis of the bovine brucellosis in milk and serum samples in dairy cattle in Argentine. Prev Vet. Med, 36 (3), 211-7.
• Yi EC, Hackett M,2000: Rapid isolation method for lipopolysaccharide and lipid A from gram negative bacteria. Analyst, 125(4),651-656.