Kestane Tohumundan (Castanea sativa) Lipaz Enziminin Saflaştırılması ve Kinetik Özelliklerinin İncelenmesi
Öz
Bu çalışmada, ülkemizde Giresun İli ve çevresinde bol miktarda yetişen kestane (Castanea Sativa) tohumlarından lipaz enzimi ilk defa saflaştırıldı ve kinetik özellikleri incelendi. Petrol eteri ile yağı uzaklaştırılmış kestane tohumları 0,06 M sodyum fosfat tamponu (pH=7,0) ile homojenize edildi. Lipaz esteraz aktivitesi gösteren homojenizatın % 90’lık (NH4)2SO4 kesiti elde edildi. Dializden sonra bu kesit sırasıyla hidroksilapatit ve DEAE-selüloz kolonlara uygulanarak lipaz enzimi 186,87 kez saflaştırıldı. SDS-PAGE elektroforezi sonucunda saflaştırılan enzimin molekül ağırlığının 30 kDa olduğu bulundu. Kestane tohumlarından saflaştırılan lipazın optimum pH’sının 9,0; optimum sıcaklığının 30 °C olduğu bulundu. Enzimin çeşitli substratlara karşı ilgisi incelendiğinde, lipazın ilgisinin en çok p-NFM’a olduğu ve Km ve Vmax değerlerinin sırasıyla 1,017 mM ve 163,874 U olduğu saptandı.
Anahtar Kelimeler
Kestane (Castanea sativa) tohumu , lipaz , karakterizasyon , saflaştırma
Kaynakça
- Abdou, M. A. 2003. Purification and partial characterization of psychrotrophiz Serratia marcescens lipase. Journal of Dairy Science, 86, 127-132.
- Beisson, F., Gardies, A. M., Teissere, M., Ferte, N., Noat, G. 1997. An esterase neo synthesized in post-germinated sunflower seeds is related to a new family of lipolytic enzymes. Plant Physiology and Biochemistry, 35, 761-765.
- Bhardwaj, K., Raju, A., Rajasekharan, R. 2001. Identification, purification, and characterization of a thermally stable lipase from rice bran. a new member of the (phospho) lipase family. Plant Physiology, 127, 1728-1738.
- Bilgin Sökmen, B. 2005. Kayısı (Armeniaca vulgaris Lam.) tohumlarından lipazın saflaştırılması ve çeşitli taşıyıcılara immobilize edilmesi. Doktora Tezi, İstanbul Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, İstanbul, Türkiye, 137s,
- Dharmsthiti, S., Ammaranond, P. 1997. Purification and characterization of lipase from a raw-milkyeast (Trichosporon asteroides). Applied Biochemistry and Biotechnology, 26, 111-116.
- Erlanson, C. 1970. p-Nitrophenylacetate as a substratefor a carboxyl-ester hydrolase in pancreatic juice and ıntestinal content. Scandinavian Journal of Gastroenterology, 5, 333-336.
- Gupta, R., Gupta, N., Rathi, P. 2004. Bacterial lipases: An overview of production, purification and biochemical properties. Applied Microbial Biotechnology, 64, 763-781.
- Haas, M. J., Cichowicz, D. J., Dierov, J. K. 2001. lipolytic activity of californica-laurel (Umbellularia californica) seeds. Journal of American Oil Chemist’s, 78, 1067-1071.
- Hasan, F., Aamer, A. S., Hameed, A. 2006. Industrial applications of microbial lipases. Enzyme and Microbial Technology, 39, 235-251.
- Laemmli, U. K. 1970. Cleavage of structural proteins during the. aassembly of the head of bacteriofage T4. Nature, 227, 680-685.