Purification and Characterization of Tyrosinase Enzyme from the Edible Kanlıca Mushrooms (Lactarius salmonicolor)

Yıl 2018, Cilt: 8 Sayı: 2, 10 - 23, 31.12.2018

Bahar Bilgin Sökmen , Betül Yılmazoğlu

https://doi.org/10.31466/kfbd.412186

Cited By: 1

Öz

Tyrosinase (EC 1.14.18.1) is an enzyme containing copper that found in fungi, high plants and animals. Furthermore, it is catalyses there actions oxidation to o-quinones of o-diphenols and hydroxylation of monophenolsto o-diphenols using molecular oxygen. In this study, tyrosinase enzyme was purified for the first time from Kanlıca Mushroom (Lactarius salmonicolor) plenty of grown in Giresun Province and around and examined the kinetic properties. Optimum pH and temperature, pH and temperature stability, optimum reaction time, determining the optimum reaction time was the appropriate enzyme and substrate concentrations. The optimum pH of the purified tyrosinase from mushroom Kanlıca 6.0 was found to be optimal at 40ºC. The purified enzyme, which showed SDS-PAGE, had a molecular weight of 30 kDa.The Km and Vmax values of L. Salmonicolor tyrosinase toward were determined by Lineweaver Burk method.

Anahtar Kelimeler

Kanlıca Mushroom (Lactarius salmonicolor), Tyrosinase, Purification, Characterization

Tirozinaz Enziminin Giresun Yöresinde Yetişen Yenilebilir Kanlıca Mantarından (Lactarius salmonicolor) Saflaştırılması ve Karakterizasyonu

Öz

Tirozinaz (EC. 1.14.18.1) funguslarda, yüksek bitkilerde ve hayvanlarda bulunan; moleküler oksijenin etkisiyle monofenollerin o-difenollere hidroksilasyonu; o-difenollerin de o-kinonlara oksidasyon reaksiyonlarını katalizleyen ve bakır içeren bir enzimdir. Bu çalışmada, Giresun İli ve çevresinde bol miktarda yetişen Kanlıca Mantarından (Lactarius salmonicolor) tirozinaz enzimi ilk defa saflaştırıldı ve kinetik özellikleri incelendi. Optimum pH ve sıcaklık değerleri, pH ve sıcaklık stabiliteleri, optimum reaksiyon süresi, optimum reaksiyon süresinin tayini, uygun enzim ve substrat konsantrasyonu belirlendi. Kanlıca mantarından saflaştırılan tirozinazın optimum pH’sının 6,0; optimum sıcaklığının 40°C olduğu bulundu. SDS-PAGE elektroforezi sonucunda saflaştırılan enzimin molekül ağırlığının 30 kDa olduğu bulundu. L. Salmonicolor tirozinaz enziminin optimum pH ve sıcaklıkta L-tirozin substratı için Km ve Vmax değerleri Linewear-Burk yöntemi ile bulunmuştur. 

Anahtar Kelimeler

Kanlıca Mantarı (Lactarius salmonicolor), Tirozinaz, Saflaştırma, Karakterizasyon

Kaynakça

• Chen, J.S., Cheng-i, W., Marshall, M.R. (1991). Inhibition Mechanism of Kojisc Acid on Polyphenol Oxidase, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 39 (11), 1897-1901.
• Güngör, K. (2008). Çağla Badem (Prunus dulcis) Bitkisinden Polifenol Oksidaz Enziminin Saflaştırılması ve Karakterizasyonu, Yüksek Lisans Tezi, Sakarya Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Sakarya.
• Jiang, Y.M. (1999). Purification and Some Properties of Polyphenol Oxidase of Longan Fruit, Food Chemistry, 66: 75-79.
• Kacar, B.( 2010). Çay Bitkisi Biyokimyası Gübrelenmesi İşleme Teknolojisi. Nobel Yayın Dağıtım, Ankara, 355 s.
• Karlıdağ, H., Eşitken, A., Turanç, T., Şahin, F. (2007). Effects of Root İnoculation of Plant Growth Promoting Rhizbacteria (PGPR).
• Keleş, F. (1987). Gıdalarda Enzimatik Esmerleşme ve Kontrolü, Doğa Dergisi, 11,105-121
• Laemmli, U. K. (1970). Cleavage of Structural Proteins During the. Aassembly of the Head of Bacteriofage T4. Nature, 227, 680-685.
• Laurila, E., Kervinen, R., Ahvenainen, R. (1998). The Inhibition of Enzymatic Browning in Minimally Processed Vegatables and Fruits, Postharvest News and Information, 9 (4), 53-66.
• Linnaeus, C. (1753). Species Plantarum: Tomus II. Holmiae. (Laurentii Salvii), pp. 1172.
• Lowry, O.H., Rosebrough, N.J., Farr, A.L., Randall, R.J. (1951). Protein Measurement with Folin Phenol Reagent, Journal of Biological Chemistry, 193, 265-275.
• Polaina, J.,MacCabe, A. P.( 2007). Industrial Enzymes: Structure, Applications of Quadratic Functions, 17, 250-255.
• Ramsbottom, J. (1953). Mushrooms&Toadstools. Collins. ISBN.
• Rodriguez, C. S., Herrera T. (2006). Industrial and Biotechnological Applications of Laccases: Areview, Biotechnology Advances, 24, 500-513.
• Spille, G. A. (1997). Caffeine, Chapter 3. Tea: The Plant and Its Manufacture; Chemistry and Consumption of the Beverage, CRC Press, 1-38.
• Şimşek, Ş., Yemenicioğlu, A. (2007). Partial Purification and Kinetic Characterization of Mushroom Stem Polyphenol oxidase and Determination of its Storage Stability in Different Lyophilized Forms, Process Biochemistry, 42, 943-950.
• Uylaşer, V., Korukluoğlu, M., Göçmen, D., Yıldırım, A., Şahin, İ. (2000). Yeşil Zeytin Üretiminde Farklı Çeşit ve Uygulamaların Ürun Kalitesine Etkisi. Türkiye 1. Zeytincilik Sempozyumu, 6-9 Haziran Bursa, 222-226.
• Ünal, M.Ü., Şener, A. ( 2006). Determination of Biochemical Properties of Polyphenol Oxidase from Emir Grape (Vitisvinifera L. Cv. Emir), Journal of Science Food Agriculture, 86, 2374-2379.
• Ünal, M.Ü. (2007). Properties of Polyphenol Oxidase from Anamur Banana (Musacavendishii), Food Chemistry, 100, 909-913.
• Vamos-Vigyazo, L. (1981). Polyphenol Oxidase and Peroxidase in Fruits and Vegetables, CRC Critical Reviews Food Science and Nutrition, 15, 49-127.
• Warburg, O., Christian, W. (1941). Isolierungund Kristallinsation Des Garungsferments Enolase, Biochemische Zeitschrift, 310, 384-421.