Evcil Köpeklerde (Canis Familiaris) Demodex Canis’in (Acarina: Demodicidae) Moleküler Karakterizasyonu

Öz

Kanin demodikozis (KD) Demodex akarlarının (Acarina: Demodicidae) kıl köklerinde ve yağ bezlerinde aşırı çoğalmasının neden olduğu inflamatuar bir deri hastalığıdır. Bugüne kadar evcil köpeklerde Canis familiaris bildirilen üç Demodex türü D. canis, D. injai ve D. cornei’dir. Türkiye’de pet köpeklerinde Demodex spp.’nin morfolojik identifikasyonu ile ilgili raporlar vardır. Buna rağmen Türkiye'de evcil köpeklerde Demodex akarlarının iyi tanımlanmış mitokondriyal DNA gen sekanslarının moleküler karakterizasyonu ile ilgili raporlar yoktur. Bu çalışmanın amacı Türkiye'de evcil köpeklerde (Canis familiaris) D. canis üzerine ilk moleküler karakterizasyon verilerini ortaya çıkarmaktır. Demodex akarları KD'li köpeklerin deri kazıntılarından elde edildi ve mikroskobik incelemeler ile D. canis olarak teşhis edildi. Mitokondriyal DNA’nın 12S rRNA geni çoğaltıldı, sekanslandı ve Genbank’ta BLAST analizleriyle mevcut bilinen Demodex sekansları ile karşılaştırıldı. Araştırmada elde edilen D. canis izolatı (DP-Samsun, MH374631) Çin’de daha önce köpeklerde rapor edilen D. canis 12S rRNA gen sekansı (KX264486, Demo.can2) ile % 100 (474/474) olarak eşleşti. Türkiye'den D. canis'in 12S rRNA dizisi (MH374631) ile Çin'den  rapor edilmiş D. canis izolatlarının (KX264486-88) 12S rRNA sekansları arasındaki ikili hizalama analizleri % 0,0 ile % 0,6 arasında değişen farklılıkları ortaya çıkarmıştır. Sonuç olarak bu araştırma ile Türkiye’de ilk kez evcil köpeklerde D. canis türünün moleküler karakterizasyonu mitokondriyal DNA sekansları kullanarak sağlandı. 

Anahtar Kelimeler

• Demodex canis,DNA dizileme,köpek,moleküler karakterizasyon,PZR

Molecular Characterization of Demodex Canis (Acarina: Demodicidae) in Domestic Dogs (Canis Familiaris)

Öz

Canine demodicosis (CD) is an inflammatory skin disease caused by excessive proliferation of Demodex mites (Acarina: Demodicidae) former in the dogs’ follicles latter in the sebaceous glands. To date Demodex canis, D. injai, and D. cornei are the three Demodex species that recognized in the domestic dog Canis familiaris. There are reports of morphological identification of Demodex spp. from pet dogs in Turkey. Nevertheless there had been no reports of characterizing the Demodex mite from pet dogs in Turkey using well-defined mitochondrial DNA gene sequences. The aim of the present study is to reveal first molecular characterization data on D. canis infesting domestic dogs (Canis familiaris) in Turkey. Demodex mites were obtained from skin scrapings of dogs with CD and identified microscopically as D. canis. The mitochondrial DNA 12S (mtDNA 12S) rRNA gene amplified, sequenced and compared with available Demodex sequences in Genbank using BLAST analyses. D. canis isolate (DP-Samsun, MH374631) obtained in the study matched 100% (474/474) with previously reported gene sequences for the 12S rRNA of mtDNA in D. canis (KX264486, isolate Demo.can2) from dogs in China. Pairwise comparison between the 12S rRNA sequences of the D. canis from Turkey (MH374631) and other mtDNA rRNA gene of D. canis isolates from China (KX264486-88) presented differences ranging from 0.0 to 0.6 %. In conclusion, within the present study, we provided the molecular characterization of D. canis in domestic dogs for the first time by sequencing of the partial mtDNA in Turkey. 

Anahtar Kelimeler

• Demodex canis,Dog,Molecular characterization,PCR,Sequencing

Kaynakça

1. Altschul SF, Gish W, Miller W, Myers EW, Lipman DJ. Basic local alignment search tool. J. Mol. Biol. 1990; 215: 403-410.
2. Beyazit A, İnceboz T, Över L. Tek tıp, tek sağlık konseptine katkı: Demodicosisli bir köpek. Turkiye Parazitol. Derg. 2010; 34(1), 68-71.
3. Cheng J, Liu CC, Zhao YE, Hu L, Yang YJ, Yang F, Shi ZY. Population identification and divergence threshold in Psoroptidae based on ribosomal ITS2 and mitochondrial cox1 genes. Parasitol. Res. 2015; 114: 3497-3507.
4. De RM, Riazzo C, Callejón R, Guevara D, Cutillas C. Morphobiometrical and molecular study of two populations of Demodex folliculorum from humans. Parasitol. Res. 2012; 110: 227-233.
5. Deger S, Tascı S, Akgül Y, Alkan İ. Van ve yöresinde evcil hayvanlarda ektoparaziter dermatitisler. Y. Y. Üniv. Vet. Fak. Derg. 1994; 5(1): 155-161.
6. Frank LA, Kania SA, Chung K, Brahmbhatt R. A molecular technique for the detection and differentiation of Demodex, mites on cats. Vet. Dermatol. 2013; 24: 82-83.
7. Hall TA. BioEdit: a user-friendly biological sequence alignment editor and analysis program for Windows 95/98/NT. Nucleic Acids Symp. Ser. 1999; 41: 95-98.
8. Hu L, Yang Y, Zhao Y, Niu D, Yang R, Wang R, Li X. DNA barcoding for molecular identification of Demodex based on mitochondrial genes. Parasitol. Res. 2017; 116(12): 3285-3290.

9. Izdebska JN, Rolbiecki L. The status of Demodex cornei: description of the species and developmental stages, and data on demodecid mites in the domestic dog Canis lupus familiaris. Medical and Vet. Entomol. 2018; https://doi.org/10.1111/mve.12304.
10. Kearse M, Moir R, Wilson A, Stones-Havas S, Cheung M, Sturrock S, Buxton S, Cooper A, Markowitz S, Duran C, Thierer T, Ashton B, Mentjies P, Drummond A. Geneious Basic: an integrated and extendable desktop software platform for the organization and analysis of sequence data. Bioinformatics 2012; 28(12): 1647-1649.
11. Kumar S, Stecher G, Tamura K. MEGA7: molecular evolutionary genetics analysis version 7.0 for bigger datasets. Mol. Biol. Evol. 2016; 33: 1870-1874.
12. Maden M, Er C, Kav, K, Özdemir Ö. İngiliz pointer ırkı bir köpekte Demodex canis kökenli atipik dermatitis olgusunun başarılı sağaltımı. Kafkas Üniv. Vet. Fak. Derg. 2012; 18(6): 1073-1077.
13. Pekmezci D, Pekmezci GZ, Guzel M, Cenesiz S, Gurler AT, Gokalp G. Efficacy of amitraz plus inactivated parapoxvirus ovis in the treatment of canine generalised demodicosis. Vet. Rec. 2014; 174(22): 556-556.
14. Sastre N, Francino O, Curti JN, Armenta TC, Fraser DL, Kelly RM, Hunt E, Silbermayr K, Zewe C, SaÂnchez A, Ferrer L. Detection, prevalence and phylogenetic relationships of Demodex spp and further skin prostigmata mites (Acari, Arachnida) in wild and domestic mammals. PLoS One 2016; 11:e0165765.
15. Scott DW, Miller WM, Griffin CE (2001) Parasitic Skin Diseases, In: Muller and Kirk’s Small Animal Dermatology, Ed; Di Berardino C, 6th Ed., W.B. Saunders Company, Philadelphia, USA. pp. 423–516.
16. Silbermayr K, Horvath-Ungerboeck C, Eigner B, Joachim A, Ferrer L. Phylogenetic relationships and new genetic tools for the detection and discrimination of the three feline Demodex mites. Parasitol. Res. 2015; 114(2): 747-752.
17. Simon C, Frati F, Beckenbach AT, Crespi B, Liu H, Flook P. Evolution, weighting and phylogenetic utility of mitochondrial gene sequences and a compilation of conserved polymerase chain reaction primers. Entomol. Soc. Am. 1994; 87: 651-701.
18. Thompson JD, Higgins DG, Gibson TJ. CLUSTAL W: improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting, position-specific gap penalties and weight matrix choice. Nucleic Acids Res. 1994; 22: 4673-4680.
19. Zhao YE, Cheng J, Hu L, Ma JX. Molecular identification and phylogenetic study of Demodex caprae. Parasitol. Res. 2014; 113: 3601-3608.
20. Zhao YE, Hu L, Ma JX. Molecular identification of four phenotypes of human Demodex mites (Acari: Demodicidae) based on mitochondrial 16S rDNA. Parasitol. Res. 2013; 112(11): 3703-3711.