İN VİTRO SIĞIR EMBRİYOSU ÜRETİM VE TRANSFERİ

Öz

Bu çalışmanın amacı, mezbahadan elde edilen sığır oositlerinden in vitro koşullarda embriyo elde edilmesi ve bunların taşıyıcı ineklere transfer edilerek yavru elde etme imkanlarının araştırılmasıdır. Oositlerin in vitro maturasyonu için, %10 Fötal Buzağı Serumu (FCS) ve 2µg/ml FSH katkılı TCM-199 ile 20-22 saat inkubasyon periyodu, in vitro fertilizasyonu amacıyla Brackett ve Oliphant (BO) mediumu ile direkt yıkama metodu ve 5-6 saat inkubasyon süreci, embriyoların in vitro kültürü amacıyla aminoasitli Charles Rosencrans (CR1aa) mediumu kullanılmıştır. Oositlerin kültür periyotlarında 39 oC, % 5 CO2 ve % 95’in üzerinde nem sağlayan inkubatör kullanılmıştır. 12 mezbaha ziyaretinde 230 ovaryum toplanmış, bunlardan aspirasyon ve dilimleme yoluyla, 1661 iyi kalite (A ve B), 498 C kalite ve dejenere oosit elde edilmiştir. Ovaryum başına; 7.22 iyi kalite, 2.16 C kalite ve dejenere oosit olmak üzere toplam 9.38 oosit elde edilmiştir. Morfolojik kalite sınıflandırmasına göre A ve B kalite olan inek oositleri embriyo elde edilme sürecine alınmıştır. Çalışma sonucunda, % 92.0 maturasyon; % 72.0 bölünme ve % 34.0 morula-blastosiste gelme oranına ulaşılmıştır. Rastgele seçilen oositlerin ölü spermatozoonlarla gerçekleştirilen fertilizasyon işlemlerinin ardından partenogenetik bölünme oranı % 4.5 olarak bulunmuştur. İn vitro embriyoların beş taşıyıcıya taze olarak transfer edilmesini izleyen 50. günde ultrasonla yapılan muayenede iki gebelik tespit edilmiş bunlardan sağlıklı bir buzağı doğumu gerçekleşmiştir. Sonuç olarak, mezbahalardan alınan ovaryumların oosit kaynağı olarak kullanılabileceği, invitro fertilizasyon ve embriyo transferi ile sağlıklı buzağı elde edilebileceği görülmüştür.

Anahtar Kelimeler

• İn vitro, Embriyo, Maturasyon, Fertilizasyon, Sığır, Transfer

In vitro Embryo Production and Transfer in Cattle

Öz

The aim of the study is to produce in vitro cattle embryos and to transfer to recipient cows then to provide calves. TCM-199 + 10% Fetal Calf Serum (FCS) + 2µg/ml FSH and 20-22 hours incubation period were used for in vitro maturation. Direct washing method by Brackett and Oliphant (BO) medium and 5 or 6 hours incubation period were used for in vitro fertilization. Charles Rosencrans (CR1aa) medium was used for in vitro emryo culture. Oocytes incubation was done in 39 oC, 5 % CO2 and over than % 95 humidity for each IVM, IVF and IVC procedures. 230 ovaries were collected after 12 visited to sloughterhouse. 1661 A and B quality oocytes and 498 C quality and degenerated oocytes were collected by aspirating and slicing of ovaries. 7.22 A and B quality oocytes and 2.16 C quality and degenerated oocytes totally 9.38 oocytes provided from per ovaries. Only A and B quality oocytes were used for production of in vitro embryos. Maturation rate was 92.0 %, cleavage rate was 72.0 % and coming into morulae-blastocyst stage rate was 34.0 %. Killed spermatozoa were used to diagnosis of the parthenogenetical cleavage rate. Parthenogenetic cleavage rate was 4.5 % after taken some oocytes sample randomly. In vitro produced embryos were transferred to five recipient cows. Two pregnancies were diagnosed by ultrasound imaging in the 50th day after transfers then one healthy calf delivered.

Anahtar Kelimeler

• In vitro, Embryo, Maturation, Fertilization, Cattle, Transfer