SIĞIRLARDA OVUM PİCK-UP (OPU) TEKNİĞİ KULLANILARAK İN VİTRO EMBRİYO ÜRETİMİ

Öz

Bu çalışmanın amacı, sığırlarda birim zamanda elde edilen embriyo sayısını artırmak için ultrason rehberliğinde oosit toplanması (Ovum pick-up, OPU) yönteminin kullanım imkanlarının araştırılmasıdır. Çalışmada, Lalahan Hayvancılık Merkez Araştırma Enstitüsünde barındırılan 3-7 yaş arasında bulunan sekiz baş Siyah Alaca inek oosit vericisi olarak kullanılmıştır. Ultrason rehberliğinde oosit toplamak amacıyla 7.5MHz’lik konveks prob ve aspirasyon iğnesinin birlikte yerleştirilmiş ve sığırlardaki transvaginal çalışmalar için geliştirilmiş olan özel ekipman kullanılmıştır. OPU uygulamaları, her hayvanda iki eşit periyot halinde ve periyotlar arasında fizyolojik dinlenme süreci bırakılmak kaydıyla düzenli olarak her hafta ve toplam 16 kez gerçekleştirilmiştir. Elde edilen oositlerin in vitro maturasyonları için TCM-199 (Tissue Culture Medyum) medyumu, fertilizasyonları için Brackett ve Oliphant (BO) medyumu ile direkt yıkama yöntemi, in vitro kültürleri içinse Charles Rosencrans aminoasitli (CR1aa) medyumu kullanılmıştır. Bütün süreçlerde, %5 CO2, % 95’in üzerinde bağıl nem ve 38.5oC sıcaklığa sahip inkubatör kullanılmıştır. Çalışma boyunca 122 OPU uygulaması gerçekleştirilerek birinci periyotta 565, ikinci periyotta ise 264 olmak üzere toplam 829 foliküle punksiyon yapılmış ve 228 adet oosit elde edilmiş, OPU uygulaması başına ortalama 1.90.20 adet oosit toplanmıştır. Bu oositlerin A+B+C kalite olanları in vitro embriyo elde etme sürecine alınmış ve 48. saatte ortalama 0.30.09 adet embriyo gelişimi kaydedilmiştir. İn vitro kültür süreci sonunda ise blastosist aşamasına yedi adet embriyo gelmiştir. Bireyler ve periyotlar arasında, tespit edilen ortalama folikül ve oosit sayıları bakımından önemli farklılıklar tespit edilmiştir. Sonuç olarak, ineklerde gözlenen folikül sayılarının düşük olduğu buna bağlı olarak elde edilen oosit sayısının ve elde edilen embriyo sayısının da arzu edilen düzeyde olmadığı görülmüştür. Bu veriler ışığında sığırlarda OPU tekniğinin oosit toplanması amacıyla uygulanabileceği ancak embriyo elde edilmesi için oosit vericilerinin seçimine ve bakım-besleme şartlarının optimal olmasına özen gösterilmesi gerektiği kanısına varılmıştır.

Anahtar Kelimeler

• Sığır, Oosit toplanması, Ultrason, İn vitro embriyo üretimi

In vitro Embryo Production of Cattle by Ovum Pick up (OPU) Technique

Öz

The aim of the study is to investigate the possibilities of ovum pick-up (OPU) technique for increasing the number of embryo production from cattle. Eight Holstein Friesian cows aged between 3-7 years and housed in Lalahan Central Livestock Research Institute were used as oocyte donors. A special attachment designed for transvaginal studies, with 7.5 MHz transducer and aspirating needle apparatus was used for oocytes aspiration from donors. OPU sessions were applied once a week regularly for each donor. The study was divided into two periods. A refreshment season was put between each period for animal resting physiologically. Each donor jointed eight sessions per periods then 16 sessions were done totally during this study. Tissue Culture Medium-199 (TCM-199) was used for in vitro maturation of oocytes. Direct washing method with Brackett and Oliphant medium (BO) was used for in vitro fertilization process. Amino acids added Charles Rosencrans (CR1aa) medium was used for in vitro culture. Five percent CO2, over 95 % of humidity and 38.5oC environmental condition was used in the incubator for oocyte maturation, fertilization, and also embryo culture. Total 122 OPU sessions were realized during this study then 565 follicles at first period and 264 follicles at second period were punctured. Eight hundred twenty nine follicles were aspirated in two periods totally. After the study 228 oocytes were taken from donors. Average number of aspirated oocytes was 1.9±0.20 per OPU session. The A, B, C quality oocytes were put together in in vitro culture process after qualification according to cumulus oocytes complex. Average cleavage rate was 0.3±0.09 at 48 hours after fertilization. Seven embryos were reached blastocyts stage during the study. There have been differences statistically between two periods for the number of follicles and each cow. Also each period showed significant difference for aspirated oocytes. As a result, the number of embryos and oocytes were low because the average number of punctured follicles was limited for each cow. But it is the author’s belief that OPU technique can be used to provide oocytes from live donor cows. Genetically best donors and proper nutritional and environmental conditions should be selected for OPU sessions

Anahtar Kelimeler

• Cattle, Oocyte aspiration, Ultrasound, In vitro embryo production