DENEYSEL TASARIM METODU KULLANILARAK YÜKSEK PERFORMANSLI SIVI KROMATOGRAFİSİ İLE AMOKSİSİLİN TAYİNİ

Öz

   Yaygın bir antibiyotik olan amoksisilinin analizinde yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) kullanılmaktadır. İlaç endüstrisinde gerçekleştirilen analizlerde zaman ve maliyet önemlidir. Bu nedenle bu çalışmada HPLC ile amoksisilin analizinde optimizasyon için kemometrik yöntemler kullanılmıştır. Mobil fazın metanol oranı, pH’sı ve akış hızı faktör olarak, alıkonma zamanı, pik alanı ve pik yüksekliği cevap yüzeyi olarak belirlenmiştir. Faktörler ve cevap yüzeyleri arasındaki bağıntı Design Expert 7.0.0. programı kullanılarak elde edilmiştir. Optimizasyon, alıkonma zamanı 5-6 dakika tutularak gerçekleştirilmiştir. Deneysel optimizasyon değerleri Merkezi Bileşik Tasarım Yöntemiyle hesaplanan değerlerle karşılaştırıldığında, pH için %99,6, akış hızı için %95, metanol yüzdesi için %98 doğruluk tespit edilmiştir. Phenomenex C18 100A (250×4,00 mm, 5 µm) kolonunun kullanıldığı yöntemde optimum koşullar %15 metanol, pH 8,5 ve akış hızı 0,8 mL/dk şeklinde belirlenmiş, yöntemin belirleme sınırı (LOD, alan için) 0,0134 mg/L ve tayin sınırı (LOQ, alan için) 0,0452 mg/L olarak saptanmıştır.  

Anahtar Kelimeler

• Antibiyotik,amoksisilin,HPLC,kemometri

DETERMINATION OF AMOXYSILINE BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY USING EXPERIMENTAL DESIGN METHOD

Öz

   High performance liquid chromatography (HPLC) is used for analysis of amoxicillin which is an antibiotic widely used. Time and cost of analysis performed in the pharmaceutical industry are important. Therefore, in this study, chemometric methods were used to optimize amoxysiline analysis by HPLC. The percentage of methanol in the mobile phase, pH and flow rate were used as a factor, the retention time, peak area and peak height were defined as the response surface. Correlation between these factors and the response surface was obtained using Design Expert 7.0.0. program. Optimization was performed by keeping retention time around 5-6 min. The experimental optimization variables values and calculated optimization variables values by using Central Composite Design Method were compared, and the accuracy of 99.6% for pH, 95% for flow rate and 98% for methanol percentage was determined. Optimum conditions for HPLC method with Phenomenex C18 100A (250 x 4.00 mm, 5 μm) column were 15% methanol, 8.5 pH and 0.8 mL/min flow rate, and the analytical performance of the method was as follows: limit of detection (LOD, for area) 0.0134 mg/L and limit of quantification (LOQ, for area) 0.0452 mg/L.

Anahtar Kelimeler

• Antibiotic,amoxicillin,HPLC,chemometry

Kaynakça

1. [1] KOÇ TÜRKOĞLU, F., Pediatri Kliniğine Başvuran Annelerin Çocuklarda Antibiyotik Kullanımı Konusundaki Bilgi ve Tutumlarının araştırılması, T.C. Sağlık Bakanlığı Göztepe Eğitim ve Araştırma Hastanesi, Aile Hekimliği ,Uzmanlık Tezi, İstanbul, 2008.
2. [2] CHARLES, B., CHULAVATNATOL, S., “Simple Analysis of Amoxicillin in Plasma by High Perfomance Liquid Chromatography with Internal Standardization and Ultraviolet Detection”, Biomedical Chromatography, 7(4), 204-207, 1993.
3. [3] YUAN, Z., RUSSLIE, H.Q., CANAFAX, D.M., “Sensitive Assay for Measuring Amoxicillin in Human Plasma and Middle Ear Fluid Using Solid–Phase Extraction and Reversed-Phase High-Performance Liquid Chromatography”, Journal of Chromatographt B, 674, 93-99, 1995.
4. [4] YUAN, Z., RUSSLIE, H.Q. CANAFAX, D.M., “High Performance Liquid Chromatographic Analysis of Amoxicillin in Human and Chinchilla Plasma, Middle Ear Fluid and Whole Blood”, Journal of Chromatography B, 692, 361-366, 1997.
5. [5] FONTANA, G., LICCIARDI, M., MANSUETO, S., SCHILLACI, D., GIAMMONA, G., “Amoxicillin- loaded Polyethylcyanoacrylate nanoparticles: Influence of PEG coating on the particle size, drug release rate and phagocytic uptake”, Biomaterials, 22, 2857-2865, 2001.
6. [6] HOLSTEGE, D.M., PUSCHNER, B., WHITEHEAD, G., GALEY, F.D., “Screening and Mass Spectral Confirmation of β-Lactam Antibiotic Residues in Milk Using LC-MS/MS”, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 50, 406-411, 2002.
7. [7] DOUSA, M., HOSMANOVA, R., “Rapid determination of amoxicillin in premixes by HPLC”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 37, 373–377, 2005.
8. [8] KERC, J., OPARA, J., “A New Amoxicillin/Clavulanate Therapeutic System: Preparation, in vitro and Pharmacokinetic Evaluation”, International Journal of Pharmaceutics, 335, 106–113, 2007.

9. [9] ASHNAGAR, A., NASERI, N.G., “Analysis of Three Penicillin Antibiotics (Ampicillin, Amoxicillin and Cloxacillin) of Several Iranian Pharmaceutical Companies by HPLC”, E-Journal of Chemistry, 4, 536-545, 2007.
10. [10] TAVAKOLI, N., VARSHOSAZ, J., DORKOOSH, F., ZARGARZADEH, M.R., “Development and Validation of a Simple HPLC Method for Simultaneous in Vitro Determination of Amoxicillin and Metronidazole at Single Wavelength”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 43, 325-329, 2007.
11. [11] AY, F., Advanced Oxidation Treatment of Antibiotic Containing Water, Dokuz Eylül Üniversitesi, Fen Enstitüsü Bilimleri, İzmir, 2009.
12. [12] BEG, S., KOHLI, K., SWAIN, S., HASNAIN, M.S., “ Development and Validation of RP-HPLC Method for Quantitation of Amoxicillin Trihtdrate in Bulk and Pharmaceutical Formulations Using Box-Benhnken Experimental Design”, Journal of Liquid Chromatography and Related Technologies, 35, 393-406, 2012.
13. [13] AÇIKALIN, K., Çeşitli Biyokütle Atık Maddelerin Pirolizi ve Elde Edilen Ürünlerin Analizi, Yıldız Teknik Üniversitesi, Doktora Tezi, Fen Bilimleri Enstitüsü, İstanbul, 2010.