Kan kültürlerinden izole edilen Candida türlerinin antifungal duyarlılıklarının Sensititre YeastOne mikrodilüsyon yöntemiyle araştırılması

Öz

Amaç: Candida türlerinin neden olduğu invaziv fungal enfeksiyonlar önemli ölçüde artmıştır. Bu nedenle türlerin hızlı ve doğru tanımlanması ve duyarlılık testleri, özellikle fırsatçı enfeksiyonları içeren vakalarda oldukça önemlidir. Mikrodilüsyon esasına dayanan Sensititre YeastOne yöntemi, antifungal duyarlılık testi için Klinik ve Laboratuvar Standartları Enstitüsü referans yöntemine uygun bir alternatiftir. Sensititre YeastOne liyofilize halde antifungal içeren kuyucuklara sahip olup Candida izolatlarının Minimal İnhibitör Konsantrasyonu MİK değerlerinin belirlenmesi için geliştirilen bir yöntemdir. Çalışmamızda kan kültürlerinden izole edilmiş Candida izolatlarının Sensititre YeastOne kolorimetrik sistem kullanılarak antifungal ilaç duyarlılığının belirlenmesi amaçlanmıştır.Yöntem: Çalışmaya Atatürk Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Laboratuvarı’nda her biri farklı hastalara ait kan kültürlerinden izole edilen 50 Candida izolatı 16 Candida albicans, 14 Candida tropicalis, 10 Candida glabrata, 8 Candida parapsilosis, 2 Candida kefyr ve iki adet kalite kontrol suşu Candida krusei ATCC 6258, Candida parapsilosis ATCC 22019 dahil edilmiştir. Türlerin antifungal duyarlılıkları, kolorimetrik bir sistem olan Sensititre YeastOne Trek Diagnostic Systems, ABD mikrodilüsyon yöntemi ile araştırılmıştır. Bulgular: Çalışma sonunda Candida izolatlarının tamamında MİK aralıkları; amfoterisin B için 0,12-2 μg/ml, flukonazol için 0,12-256 μg/ml, vorikonazol için 0,008-8 μg/ml, kaspofungin için 0,015-0,5 μg/ml, anidulafungin için 0,015-2 μg/ml, mikafungin için 0,0082 μg/ml, flusitozin için 0,006-8 μg/ml, posakonazol için 0,008-8 μg/ml, itrakonazol için 0,015-16 μg/ml olarak belirlenmiştir. Sonuç: Elde edilen düşük MİK değerleri göz önüne alındığında anidulafungin, mikafungin, kaspofungin, flusitozin, posakonazol, vorikonazol, itrakonazol ve amfoterisin B’nin Candida izolatlarına karşı etkin olabileceği ve flukonazole dirençli suşlarla oluşan enfeksiyonların tedavisinde alternatif ilaç olarak kullanılabilecekleri sonucuna varılmıştır

Anahtar Kelimeler

• Antifungal, Mikrodilüsyon yöntemi, Sensititre YeastOne, Candida

An investigation of antifungal susceptibilities of the Candida species isolates from blood cultures using the Sensititre YeastOne microdilution method

Abstract

Objective: Invasive fungal infections caused by Candida species have increased significantly. Therefore, rapid and correct identification to the species level and susceptibility testing have become important, especially in cases involving invasive infections. The Sensititre YeastOne method, based on the microdilution method, is an alternative to the Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI reference method for antifungal susceptibility testing. Sensititre YeastOne is a method for determining the Minimal Inhibitory Concentration MIC values of Candida isolates with wells containing lyophilized antifungals. In our study, the aim was to determine the antifungal drug sensitivity of Candida isolates from blood cultures by using a Sensititre YeastOne colorimetric system.Methods: Fifty candida isolates, each isolated from blood cultures of different patients in the Medical Microbiology Laboratory of Atatürk University Faculty of Medicine, were included in the study 16 Candida albicans, 14 Candida tropicalis, 8 Candida parapsilosis, 10 Candida glabrata, 2 Candida kefyr and two quality control strain Candida krusei ATCC 6258, Candida parapsilosis ATCC 22019 were included in the study. The antifungal susceptibilities of the species were tested by the microdilution method using a colorimetric method, Sensititre YeastOne Trek Diagnostic Systems, USA . Results: For all Candida species, MIC ranges were as follows: 0.12-2 μg/ml for amphotericin B; 0.12-256 μg/ml for fluconazole; 0.008-8 μg/ml for voriconazole; 0.015-0.5 μg/ml for caspofungin; 0.015-2 μg/ml for anidulafungin; 0.008-2 μg/ml for micafungin; 0.006-8 μg/ml flucytosine; 0.008-8 μg/ml for posaconazole and 0.015-16 μg/ml for itraconazole. Conclusion: Considering the low MIC values obtained, it was concluded that anidulafungin, micafungin, caspofungin, flucytosine, posaconazole, voriconazole, itraconazole and amphotericin B may be effective against Candida species and may be used as alternative drugs for the treatment of infections caused by fluconazole-resistant species.

Keywords

• Antifungal, Microdilution method, Sensititre YeastOne, Candida

Kaynakça

1. 1. Hancı SY, Derici YK, Şirin MC, Şamlıoğlu P, Bayram A, Ağuş N. et al. Üçüncü basamak bir hastanede, geriatrik olgularda izóle edilen kandida türlerinin tiplendirilmesi ve kanda üreyen mayalarda antifungal duyarlılık. Dicle Med J, 2015; 42 (4): 438-44.
2. 2. Atalay MA, Sav H, Demir G, Koç AN. Kan kültürlerinden izole edilen Candida türlerinin dağılımı ve amfoterisin B ve flukonazole in vitro duyarlılıkları. Selçuk Tıp Derg, 2012; 28(3): 149-51.
3. 3. Hazırolan G. Albicans-dışı Candida türlerinin flukonazol, itrakonazol, vorikonazole in vitro duyarlılığının referans sıvı mikrodilüsyon yöntem ile araştırılması: yeni türe özgü klinik direnç sınır değerleri ve epidemiyolojik eşik değerlerinin uygulanması. Türk Mikrobiyol Cem Derg, 2018; 48(1): 38-44.
4. 4. Bertout S, Dunyach C, Drakulovski P, Reynes J, Mallie M. Comparison of the Sensititre YeastOne dilution method with the clinical laboratory standards institute (CLSI) M27-A3 microbroth dilution reference method for determining MIC of eight antifungal agents on 102 yeast strains. Pathol Biol, 2011; 59(1): 48-51.
5. 5. Trek Diagnostic System. Sensititre search tool. www.trekds.com/techinfo. (Erişim tarihi: 24 Mart 2018).
6. 6. Küçükates E, Gültekin NN, Alisan Z, Hondur N, Özturk R. Identification of Candida species and susceptibility testing with Sensititre YeastOne microdilution panel to 9 antifungal agents. Saudi Med J, 2016; 37(7): 750-7.
7. 7. https://www.cdc.gov/fungal/diseases/ candidiasis/index.html. (Erişim tarihi: 04.04.2019).
8. 8. Sav H, Demir G, Atalay MA, Koç AN. Aksu N. Klinik örneklerden izole edilen Candida türlerinin değerlendirilmesi. Turk Hij Den Biyol Derg, 2013; 70(4): 175 – 80.

9. 9. Siqueira RA, Doi AM, de Petrus Crossara PP, Koga PCM, Marques AG, Nunes FG, et al. Evaluation of two commercial methods for the susceptibility testing of Candida species: Vitek and Sensititre YeastOne. Rev Iberoam Micol, 2018; 35(2):83-7.
10. 10. Furustrand Tafin U, Clauss M, Hauser PM, Bille J, Meis JF, Trampuz A. Isothermal microcalorimetry: a novel method for real-time determination of antifungal susceptibility of Aspergillus species. Clin. Microbiol. Infect, 2012; 18(7): 241-245.
11. 11. Santhanam J, Yahaya N, Aziz MN. Species distribution and antifungal susceptibility patterns of Candida species: is low susceptibility to itraconazole a trend in Malaysia? Med J Malaysia, 2013; 68(4):343-7.
12. 12. Cantón E, Pemán J, Iñiguez C, Hervás D, LopezHontangas JL, Pina-Vaz C, et al. Epidemiological cutoff values for fluconazole, itraconazole, posaconazole, and voriconazole for six Candida species as determined by the colorimetric Sensititre YeastOne method. J Clin Microbiol, 2013; 51(8): 2691-5.
13. 13. Gültekin B, Eyigör M, Tiryaki Y, Kırdar S, Aydın N. Kan kültürlerinden izole edilen Candida suşlarında antifungal duyarlılığın ve bazı virülans faktörlerinin araştırılması ve RAPD-PCR ile Genotiplendirilmesi. Mikrobiol Bul, 2011; 45(2):306-17.
14. 14. Espinel-Ingroff A, Alvarez-Fernandez M, Cantón E, Carver PL, Chen SC-A, Eschenauer G, et al. Multicenter study of epidemiological cutoff values and detection of resistance in Candida spp. to anidulafungin, caspofungin and micafungin using the Sensititre YeastOne colorimetric method. Antimicrob Agents Chemother, 2015; 59(11): 6725– 32.
15. 15. Cretella D, Barbe KE, King ST, Stover KR. Comparison of susceptibility patterns using commercially available susceptibility testing methods performed on prevalent Candida spp. J Med Microbiol, 2016; 65(12): 1445-51.
16. 16. Quindos G, Sanchez-Vargas LO, Villar-Vidal M, Eraso E, Alkorta M, Hernandez-Almaraz JL. Activities of fluconazole and voriconazole against bloodstream isolates of Candida glabrata and Candida krusei: a 14-year study in a Spanish tertiary medical centre. Int J Antimicrob Agents, 2008; 31(3): 266–71.
17. 17. Farina C, Manso E, Andreoni S, Conte M, Fazii P, Lombardi G, et al. Interlaboratory evaluation of VITEK2 system and sensititre yeastOne for antifungal susceptibility testing of yeasts isolated from blood cultures against four antifungal agents. New Microbiol, 2011; 34(2): 195-201.
18. 18. Avolio M, Grosso S, Bruschetta G, Rosa R.D. Camporese A. Direct antifungal susceptibility testing of positive Candida blood cultures by Sensititre YeastOne. New Microbiol, 2009; 32(2): 179-84.