Flow Cytometric M N Antigen Typing of Peripheral Blood Reticulocytes to Document Early Engrafment in Bone Marrow Transplant Patients

Abstract

A three color flow cytometric method was developed to rapidly detect and enumerate reticulocytes of differing MM MN and NN phenotypes in peripheral blood samples even in multiply transfused patients The analysis was performed using fluorescein and phycoerythrin conjugated monoclonal antibodies individually specific for the M and N antigens together with propidium iodide staining to quantitate cellular DNA RNA content and identify reticulocytes We used this method to identify the MN phenotype of reticulocytes and monitor erythropoiesis in patients undergoing bone marrow transplantation BMT despite multiple red cell transfusions In 6 of 8 children undergoing allogeneic BMT circulationg reticulocytes were detectable 13 to 18 days mean 15 days post transplant despite ABO differences In 4 of these 6 patients where donor and recipient were of differing MN phenotypes the method unequivocally demonstrated engrafment and expression of erythroid donor cells In these 6 patients absolute neutrophil counts of nbsp; 8805;500 956;L were attained much later from 20 to 38 days mean 29 days post transplant No stable expression of donor cells was observed in the two children who failed to engraft These data demonstrate that effective donor erythropoiesis occurs earlier than previously suggested and much sooner than sustained myelo or thrombopoiesis This method has the ability to detect donor erythropoiesis and mixed allogeneic red blood cell chimensm following BMT Key words: Bone Marrow Transplantation Engrafment Reticulocytes M N Blood Group Transfusion Erythropoiesis

Keywords

• -

Retikülositlerin M N Kan Grubu Antijenlerini Akım Sitometrisi İle İnceleyerek Kemik İliği Transplantasyonunda Erken Engrafmanın Gösterilmesi

Öz

Çok sayıda transfüzyon almış hastalarda dahi periferik kandaki farklı MM MN ve NN kan grubu antijenlerini taşıyan retikülositlerin saptanması ve sayılmasını sağlayan bir üç renkli akım sitometrisi metodu geliştirilmiştir M ve N antijenleri fluorescein ve phycoerythrin ile konjuge monoklonal antikorlarla işaretlenmiş retikülositleri göstermek ve hücresel DNA RNA içeriğini saptamak için propidium iodide ile boyama yapılmıştır Bu metod kemik iliği transplantasyonu KİT uygulanan hastalarda eritropoiezin izlenmesinde kullanılmıştır Allojen KİT uygulanan 8 hastanın 6 sında 13 18 ort 15 gün sonra ABO uyumsuzluklarına rağmen dolaşımda retikülositlerin varlığı gösterilmiştir Bu 6 hastanın 4 ünde hasta ile donörün MN kan grubu farklı olduğundan donör hücrelerinin varlığı ve engrafman kesin olarak saptanabilmiştir Retikülositlerin gösterildiği 6 hastada mutlak nötrofil sayısı 500 956;L ye çok daha geç 20 38 ort 29 günde ulaşmıştır Engrafman olmayan iki hastada donör hücrelerinin varlığı gözlenmemiştir Bulgular effektif donör eritropoiezinin sanıldığından daha erken ve kalıcı miyelo ve eritropoiezden çok daha önce başladığını göstermektedir Bu metod KİT uygulanan hastalarda donör eritropoiezini ve karışık allojen eritrosit kimerizmini göstermede kullanılabilir Anahtar kelimeler: Kemik İliği Transplantasyonu Engrafman Retikülositler M N Kan Grubu Transfüzyon Eritropoiez

Anahtar Kelimeler

• -