Immunohistochemically Investigation of the Effect of Repeated Doses of GnRH on Oestrogen α and Progesterone B Receptors in Rats

Öz

Sunulan bu çalışma da, tekrarlayan dozlarda GnRH enjeksiyonunun östrojen ve progesteron reseptörlerinin dağılımına etkisinin belirlenmesi amaçlandı. Çalışmada (n=24) adet rat kullanıldı. Gruplar; hiçbir uygulama yapılmayıp placebo enjeksiyonu yapılan kontrol grubu (n=6), tek GnRH enjeksiyonu yapılan Grup 1 (n=6), 5 gün üst üste GnRH enjeksiyonu yapılan Grup 2 (n=6), 10 gün süreyle tekrarlayan dozlarda GnRH uygulanan Grup 3 (n=6) olarak rastgele 4 gruba ayrıldı. Uygulama sonunda sakrifiye edilen ratlardan ovaryum ve uteruslar alınarak histolojik doku takip prosedürü ardından bloklandı. Kesilen dokular immunohistokimyasal olarak östrojen, progesteron reseptörlerinin dağılımı ve boyanma şiddeti yönünden incelendi. Tek doz GnRH uygulanan 1 grubunda ratlarda ovaryum ve uterusta kontrol grubuna benzer şekilde immunohistokimyasal reaksiyonlar şekillendi. 5 ve 10 gün süreyle GnRH uygulanan gruplarda ise uterusta ve ovaryumda immunohistokimyasal reaksiyonlar değişiklikler gösterdi. Kontrol ve 1 grupta ovaryumlar değerlendirildiğinde; Östrojen α reseptörlerinin, foliküllerdeki granüloza hücrelerinde, primer, sekunder ve graaf folikül duvarında granüloza hücrelerinde (+) olarak görüldü. Germinatif epitelde, damar duvarı endotel hücreleri, düz kas hücrelerinde ve interstisyel hücrelerde (+) reaksiyonlar tespit edildi. Kornu ve korpus uteri bölümlerinden alınan doku örneklerinde ise endometriyum epitelinde (+) reaksiyonlar görüldü. Grup 2 ve 3’te, ovaryum da benzer yerleşim bölgelerinde fakat boyanma şiddeti yönünden farklı şiddette reaksiyonlar tespit edildi. Progesteron B reseptörlerinin; Grup 1,2,3 ve 4’te korpus luteum luteal hücreleri, germinatif epitel, teka interna / eksterna hücreleri pozitif reaksiyon gösterdiği, gruplar arasında boyanma şiddetinin değiştiği görüldü. Kornu ve korpus uteride endometriyum epiteli, stratum bazalis bölgesi, miyometriyum ve perimetriyumda (+) reaksiyonlar tespit edilirken kontrol grubu örneklerinde miyometriyum bölgesinde (+) reaksiyon tespit edilemedi.

Anahtar Kelimeler

• Immunohistochemical
• oestrogen receptor α
• ovary
• progesterone receptor B
• uterine

Proje Numarası

VF-049

Ratlarda Tekrarlayan Dozlarda GnRH uygulamasının, Östrojen α ve Progesteron B Reseptörlerine Etkisinin İmmunohistokimyasal Olarak Araştırılması

Öz

Sunulan bu çalışma da, tekrarlayan dozlarda GnRH enjeksiyonunun östrojen ve progesteron reseptörlerinin dağılımına etkisinin belirlenmesi amaçlandı. Çalışmada (n=24) adet rat kullanıldı. Gruplar; hiçbir uygulama yapılmayıp placebo enjeksiyonu yapılan kontrol grubu (n=6), tek GnRH enjeksiyonu yapılan Grup 1 (n=6), 5 gün üst üste GnRH enjeksiyonu yapılan Grup 2 (n=6), 10 gün süreyle tekrarlayan dozlarda GnRH uygulanan Grup 3 (n=6) olarak rastgele 4 gruba ayrıldı. Uygulama sonunda sakrifiye edilen ratlardan ovaryum ve uteruslar alınarak histolojik doku takip prosedürü ardından bloklandı. Kesilen dokular immunohistokimyasal olarak östrojen, progesteron reseptörlerinin dağılımı ve boyanma şiddeti yönünden incelendi. Tek doz GnRH uygulanan 1 grubunda ratlarda ovaryum ve uterusta kontrol grubuna benzer şekilde immunohistokimyasal reaksiyonlar şekillendi. 5 ve 10 gün süreyle GnRH uygulanan gruplarda ise uterusta ve ovaryumda immunohistokimyasal reaksiyonlar değişiklikler gösterdi. Kontrol ve 1 grupta ovaryumlar değerlendirildiğinde; Östrojen α reseptörlerinin, foliküllerdeki granüloza hücrelerinde, primer, sekunder ve graaf folikül duvarında granüloza hücrelerinde (+) olarak görüldü. Germinatif epitelde, damar duvarı endotel hücreleri, düz kas hücrelerinde ve interstisyel hücrelerde (+) reaksiyonlar tespit edildi. Kornu ve korpus uteri bölümlerinden alınan doku örneklerinde ise endometriyum epitelinde (+) reaksiyonlar görüldü. Grup 2 ve 3’te, ovaryum da benzer yerleşim bölgelerinde fakat boyanma şiddeti yönünden farklı şiddette reaksiyonlar tespit edildi. Progesteron B reseptörlerinin; Grup 1,2,3 ve 4’te korpus luteum luteal hücreleri, germinatif epitel, teka interna / eksterna hücreleri pozitif reaksiyon gösterdiği, gruplar arasında boyanma şiddetinin değiştiği görüldü. Kornu ve korpus uteride endometriyum epiteli, stratum bazalis bölgesi, miyometriyum ve perimetriyumda (+) reaksiyonlar tespit edilirken kontrol grubu örneklerinde miyometriyum bölgesinde (+) reaksiyon tespit edilemedi.

Anahtar Kelimeler

• İmmunohistokimya
• Ostrojen reseptor α
• Ovaryum
• Progesteron reseptor B
• Uterus

Destekleyen Kurum

Cumhuriyet Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Başkanlığı

Proje Numarası

VF-049

Teşekkür

Çalışmamızı, VF-049 nolu proje ile destekleyen, Sivas Cumhuriyet Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Başkanlığına teşekkür ederiz.

Kaynakça

1. Referans1 Akbalık ME, Sağsöz H, Saruhan BG (2011). Localization of estrogen receptor alpha and progesterone receptor B in the bovine ovary during the follicular and luteal phase of the sexual cyle. Kafkas Univ Vet Fak Derg 17, 795-802
2. Referans2 Bancroft JD, Cook HC (1984). Manuel of Histological Techniques. Churchill Livingstone Inc. New York
3. Referans3 Brown NM, Lamartinere CA (2000). Genistein regulation of transforming growth factor-a, epidermal growth factor (EGF) and EGF Receptor expression in the rat uterus and vagina. Cell Growth Differ 11, 255-260
4. Referans4 Chiang CH, Cheng KW, Igarashi S ve ark. (2000). Hormonal regulation of estrogen receptor alpha and beta gene expression in human granulosa-luteal cells in vitro. J Clin Endocrinol Metab 85, 3828-3839
5. Referans5 Chen M, Wolfe A, Wang X ve ark. (2009). Generation and characterization of a complete null estrogen receptor alpha mouse using Cre/LoxP technology. Mol Cell Biochem 1-2, 145-153
6. Referans6 Delman HD, Eurell JA (1988). Textbook of Veterinary Histology, 5th ed Williams-Wilkins London pp: 252-325
7. Referans7 Drummond AE, Findlay JK (1999). The role of estrogen in folliculogenesis. Mol Cell Endocrinol 151, 57-64
8. Referans8 Graham JD, Clarke CL (1997). Physiological action of progesterone in target tissues. Endocr Rev 18, 502-519

9. Referans9 Haeseleer MD, Simoens P, Van den Broeck W (2006). Cell- spesific localizaion of progesteron receptors in the bovine ovary at different stages of the oestrous cycle. Anim Reprod Sci 98, 271-281
10. Referans10 Hild- Petito S, Stouffer RL, Brenner RM (1988). Immunocytochemical localization of estrodiol and progesterone receptors in the monkey ovary throughout the menstrual cycle. Endocrinology 123, 2896-2905
11. Referans11 Hulas-Stasiak M, Gawron A (2007). Immunohistochemical localization of estrogen receptors ER alpha and ER beta in the spiny mouse (Acomys Cahirinus) ovary during postnatal development. J Mol Hist 38, 25-32
12. Referans12 Janssens RM, Brus L, Cahill DJ ve ark. (2000). Direct ovarian effects and safety aspects of GnRH agonists and antagonists. Hum Reprod Update 6, 505-518
13. Referans13 King JA, Millar RP (1995). Evolutionary aspects of gonadotropin-releasing hormone and its receptor. Cell Mol Neurobiol 15, 5-23
14. Referans14 Merk FB, Botticelli CHR, Albright JT (1972). An intercellular response to estrogen by granulosa cells in rat ovary; an electron microscope study. Endocrinology 90, 992-1007
15. Referans15 Reissmann T, Schally AV, Bouchard P ve ark. (2000). The LHRH antagonist cetrorelix: a review. Hum Reprod Update 6, 322-331
16. Referans16 Rosenfeld CS, Yuan X, Manikkam M ve ark. (1999). Cloning, sequencing and localization of bovine estrogen receptor-beta within the ovarian follicle. Biol Reprod 60, 691-697
17. Referans17 Roth Ch, Leonhardt S, Seidel CH ve ark. (2000). Comparative analysis of different puberty inhibiting mechanisms of two GnRH agonists and the GnRH antagonist cetrorelix using a female model. Pediatr Res 48, 468-474
18. Referans18 Schams D, Berisha B (2002). Steroids as local regulators of ovarian activity in domestic animals. Domestic Anim Endocrinol 23, 53-65
19. Referans19 Slomczynska M, Wozniak J (2001). Differential distribution of estrogen receptor beta and estrogen receptor alpha in the porcine ovary. Exp Clin Endocrinol Diabetes 109, 238-244
20. Referans20 Soltysik K, Czekaj P, Suszka-Switek A ve ark. (2014). Changes in the subcellular and tissue location of estrogen and progesterone receptors in rat uterus after long-term treatment with analogs of gonadoliberin. Ginekol Pol 85, 254-263
21. Referans21 Srisuwatanasagul S, Tummaruk P, Kunavongkrit A (2009). Studies of oestrogen and progesterone receptors in reproductive organs of prepubertal gilts with reproductive disturbance. Thai J Vet Med 40, 15-24
22. Referans22 Teilmann SC, Clement CA, Thorup J ve ark. (2006). Expression and localization of the progesterone receptor in Mouse and human reproductive organs. J Endocrinol 191, 525-535
23. Referans23 Van den Broecck W, D’Haeseleer M ve ark. (2002). Cell-specific distribution of progesteron receptors in the bovine ovary. Reprod Domest Anim 37, 164-170
24. Referans24 Vermeirsch H, Simoens P, Ccorijn M ve ark. (2001). Immunolocalization of progesterone receptors in the canine ovary and their relation to sex steroid hormone concentrations. Reproduction 122, 73-83
25. Referans25 Wei LL, Miner R (1994). Evidence for the resistance of a third progesterone receptor protein in human breast cancer line T47D. Cancer Research 54, 340-343
26. Referans26 Winuthayanon W, Hewitt SC, Orvis GD ve ark. (2010). Uterine epithelial estrogen receptor is dispensable for proliferation but essential for complete biological and biochemical responses. Proc Natl Acad Sci 45, 19272-19277