Irak-Erbil'den Alınan Bazı Toprak Numunelerinden Streptomyces Bakterilerinin İzolasyonu, Ekstraselüler Hidrolitik Enzim Kabiliyetlerinin Belirlenmesi ve 16S rDNA Analizi
Öz
Bu çalışmada Irak’ın Erbil ilinde belli noktalardan alınan toprak numunelerinden Streptomyces cinsi bakterileri izole edilerek bazı ekstraselüler enzimlerin aktiviteleri belirlenmiş ve 16S rDNA gen bölgesinin filogenetik analizi yapılmıştır.
Seyreltme plak yöntemi ile 26 farklı Streptomyces cinsi bakteri izole edilmiş ve daha sonra saflaştırma işlemi yapılmıştır. İzole edilen 26 Streptomyces suşuna yapılan ekstraselüler hidrolitik enzim aktivitesi çalışmalarında 3 izolat ksilinaz aktivitesinde, 19 izolat amilaz aktivitesinde ve 15 izolat proteaz aktivitesinde pozitif sonuç gösterirken hiçbir izolat lipaz aktivitesi göstermemiştir.
Genomik DNA’sı izole edilen 7 izolatın 16S rDNA gen
bölgesi 27F ve 1492R evrensel primerleri ile amplifiye edilip sekans analizi
yapılmıştır. Bu sonuçlar Mega7.0.18 paket programı ile Maximum Likelihood
algoritması kullanılarak filogenetik uzaklık matrisi olan (Jukes ve Cantor
1969) metodu ile filogenetik ağaç oluşturulmuştur. Oluşan filogenetik ağaçta
NCBI’dan dizileri alınan Streptomyces suşları ile çalışmamızda kullanılan
suşlar güçlü bir homoloji ile kümelenerek filogenetik analizleri yapılmıştır.
Anahtar Kelimeler
Kaynakça
- Benson, D. A., Karsch-Mizrachi, I., Lipman, D. J., Ostell, J., Wheeler, D. L., 2004. GenBank: update. Nucleic Acids Res. 32, D23 – D26.
- Brown-Elliot, B.A., Brown, J.M., Conville, P.S., Wallace, R.J., 2006. Clinical and Laboratory features of the Nocardia spp. Based on current molecular taksonomy. Clin. Microbiol. Rev., 19: 259-282.
- Cao, L., Qiu, Z., You, J., Tan, H., Zhou, S., 2004. Isolation and characterization of endophytic Streptomyces strains from surface-sterilized tomato (Lycopersicon esculentum) roots. Letters in Applied Microbiology, 39: 425-430.
- Chater, K. F., 2001. Regulation of sporulation in Streptomyces coelicolor A3 (2): a checkpoint multiplex? Current Opinion in Microbiology 4:667–673.
- Hayakawa, M., Yoshida, Y, Iimura, Y., 2004. Selective isolation of bioaktive soil Actinomycetes belonging to the Streptomyces violaceusniger phenotyphic cluster. Journal of Applied Microbiology, 96, 973-981.
- Hossain, M. S, Hossain, M. A, Rahman, M. M., Mondol, M. A., Bhuiyan, S. A., Gray, A. I., Flores, M. I., Rashid, M. A., Amides from the fungus Streptomyces hygroscopicus and their antimicrobial activity. Phytochemistry 65:2147–2151.
- Jukes, T.H., Cantor, C.R., 1969. Evolution of protein molecules. In Mammalian protein metabolism, vol. 3, Edited by H.N. Munro.New York:Acedemic Press., 21-132.
- Kanz, C., Aldebert, P., Althorpe, N., Baker, W., Baldwin, A., Bates, K., Browne, P., van den Broek, A., Castro, M. and other authors 2005. The EMBL nucleotide sequence database. Nucleic Acids Res 33, D29–D33.
- Kumar, S., Nei, M., Dudley, J., Tamura K., 2008. MEGA: A biologist-centric software fr evolutionary analysis of DNA and protein sequences. Briefing in Bioinformatics, 9 (4): 299-306.
- Lane, D. J., 1991. 16S/23S rRNA sequencing. In Nucleic Acid Techniques in Bacterial Systematics, pp. 115–175. Edited by E. Stackebrandt & M. Goodfellow. New York: Wiley.