KAYSERİ YÖRESİNDE SÜT SIĞIRLARINDA ESCHERICHIA COLI O157:H7’NİN KONVANSİYONEL VE MOLEKÜLER YÖNTEMLERLE ARAŞTIRILMASI

Öz

Bu çalışmada, Kayseri ili ve ilçelerindeki kamu ve özel sektöre ait süt işletmelerindeki çeşitli yaş gruplarındaki sağlıklı hayvanların dışkı ve sütlerinde E. coli O157:H7’nin varlığının saptanması ve hayvansal risk faktörlerinin ortaya konulması amaçlanmıştır. Bu amaçla çeşitli ilçelerden toplanan 500 adet dışkı ve 500 adet süt örnekleri çalışmada materyal olarak kullanıldı. Immuno Magnetik Seperasyon ve ardından Chorom agar ve Sorbitol MacConkey besiyerlerinde üreyen şüpheli koloniler seçildi ve bunlar serolojik yönden H ve O agglütinasyon testi ile incelendi. Moleküler yönden ise şüpheli izolatlar multipleks PCR (mPCR) ve unipleks PCR (uPCR) teknikleri ile incelendi. Bu işlemleri sonucunda 500 süt örneğinden 1 (% 2)’inde ve 500 dışkı örneğinden 6 (% 4,6)’sında O157:NM suşu tespit edilmiş olup örneklerin hiçbirinde flagella H antijenine rastlanmadı. Dışkıdan izole edilen O157:NM suşlarına yapılan mPCR’ da bir örnekte Enterohemolysine genine (Ehly A) rastlanırken, 1 örnekte yalnızca Sitotoksin 2 (stx2) geni tespit edildi. Diğer dışkı örneklerinde virülens genlerinden hiçbirisine rastlanmadı. Sütten izole edilen bir adet O157:NM suşunda ise virülens genlerinden hiçbirisine rastlanmadı. Sonuç olarak, Kayseri ili ve ilçelerindeki işletmelerdeki süt sığırlarının dışkısında ve sütlerinde E. coli O157 belirlenmiştir. E.coli O157:H7 tespit edilmemiştir. Belirlenen kontaminasyon oranının düşük düzeylerde olduğunu, bununla birlikte Kayseri ilinde hijyen kurallarına dikkat edilmesi gerektiği sonucuna varıldı

Anahtar Kelimeler

• Sığır dışkısı, çiğ süt, E. coli O157: H7, IMS, PCR

Investigation with Conventional and Molecular Method of Escherichia Coli O157:H7 in Dairy Cattle in Kayseri Region

Öz

The objective of the present study is to investigate the animal risk factors related to the presence of E. coli O157:H7 in feces and milk samples collected from healthy cattle at differing ages in private and government dairy farms in Kayseri and its vicinity. Five hundred fecal samples and 500 raw milk samples were collected from different locations in Kayseri, processed through immune Magnetic Separation, and inoculated Chorom medium and Sorbitol MacConkey medium. Suspicious colonies were selected from this medium, and they were examined serologically with H and O agglutination test. The molecular direction suspicious isolates were examined using multiplex with PCR (mPCR) and uniplex PCR (uPCR) techniques. The examination showed that only 1 (2 %) out of 500 raw milk samples and only 6 (4.6%) out of 500 fecal samples contained O157:NM strain, and none of the samples contained flagella H antigen. Through using mPCR, only one sample from O157:NM of isolated fecal samples contained Ehly A, whereas only one sample contained stx2 genes. None of the other fecal samples contained any virulence genes. Only one raw milk sample isolated from O157:NM strain did not have any virulence genes.In conclusion, the raw milk and fecal samples collected from dairy farms in Kayseri region and its vicinity contain E. coli O157. Low levels of contamination rate was determined in the samples. However, it was concluded that due attention should be paid to hygiene rules in Kayseri

Anahtar Kelimeler

• Cattle feces, raw milk, E. coli O157:H7, IMS, PCR

Kaynakça

1. Naylor SW, Gally DL, Low JC. Enterohae- morrhagic E.coli veterinary medicine. Int. J )RRG 0LFURELRO -441
2. Nataro JP, Kaper JB. Diarrheagenic Esche- ULFKLD FROL &OLQ 0LFURELRO 5HY - 201. 3.
3. Park S, Worobo R, Durst R. Escherichia coli O157:H7 As an Emerging Foodborne Patho
4. gen: A Literature Review. Crt. Rev. Food Sci 1XWULWLRQ - 502.
5. Borczyk AA, Karmali MA, Lior H, et al. Bovi- ne reservoir for verotoxin-producing Esche- richia coli 2 + /DQFHW 8542:98
6. Kuhnert P, Dubosson CR, Roesch M, et al. Prevalance and risk- factor analysis of Shiga toxigenic Escherichia coli in feacal samples of organically and conventionally farmed dairy. 9HWHULQDU\ 0LFURELRORJ\ -45
7. Aslantaş Ö, Erdoğan S, Cantekin Z, ve ark. Isolation and characterization of verocyto- toxin- producing Escherichia coli O157 from Turkish cattle. Int. J Food Microbiol -342
8. Chapman PA, Wright DJ, Siddons CA. A com- parison of immunomagnetic separation and direct culture for the isolation of verocyto- toxin-producing E.coli O157 from bovine fa- HFHV - 0HG 0LFURELRO -427

9. Johsen G, Wasteson Y, Heir E, Gerget OI, Herikstad H. Escherichia coli O157:H7 fa- eces from cattle, sheep and pigs in the sout- heswest part of Norway during 1998 and ,QW - )RRG 0LFURELRO - 200
10. Halkman A. Gıda Mikrobiyolojisi Uygulama- ODUı %DVNı %DşDN 0DWEDDFıOıN $QND ra
11. Kobayashı H, Shımada J, Nakazawa M, et al. Prevalance Characteristics of Shiga Toxin- Producing Escherichia coli from Healthy &DWWOH LQ -DSDQ $SSO (QYLUR 0LFURELRO .484-489
12. Chapman PA, Malo ATC, Elin M,et al. E.coli O157 in cattle and sheep at slaughter, on beef and lamb carcasses and raw beef and lamb products in South Yorkshire UK, İnt .J. Food 0LFURELRO -150.
13. Warburton DW, Austin JW, Harrison BH, et al. Survival and Recovery E.coli O157:H7 in Inoculated Bottled Water. J.Food Protect -952
14. Chapman PA, Malo ATC, Sıddons CA, et al. Use of commercial enzyme immunoassays and immunomagnetic separation systems for de- tecting Escherichia coli O157 in bovine fecal VDPSOHV $SSO (QYLURQ 0LFURELRO 2549-2553.
15. Heuvelınk AE, Bleumınk B, Van Den Bıgge- laar FL, et al. Occurence and survival of ve- rocytotoxin-producing Escherichia coli O157 in raw cow’s milk in Netherlands. J. Food 3URWHFW -1601.
16. Hancock DD, Besser TE, Rıce DH, et al. Epi- demiology of Escherichia coli O157 in feedlot FDWWOH - )RRG 3URWHFW -465.
17. Bornardi S, Maggi E, Pizzin G, et al. Feacal carriage of verocytotoxin producing E.coli O157 and carcass contamination in cattle at slaughter in Northern Italy, Int. J. Food Mic- URELRO -53.
18. Rogerie F, Marecat A, Gombade S, et al. Lan- ge M.Characterization of shiga toxin produ- cing E.coli and E.coli O157 serotype E.coli isolated in France from healty domestic cattle. İQW - )RRG 0LFURELRO -223.
19. Yılmaz A, Gün H, Turan N. Manda ve Manda Karkaslarında Escherichia coli O157:H7 Varlığının araştırılması. VI. Ulusal Veteriner Mikrobiyoloji Kongresi, Fırat Üniversitesi Veteriner Fakültesi, Elazığ 2004.
20. Yılmaz A, Gun H, Yılmaz H. Frequency of Escherichia coli O157:H7 in Turkish cattle. J )RRG 3URWHFW -1640.
21. Coıa JE. Clinical, microbiological and epide- miological aspects of Escherichia coli O157 infection. FEMS Immun. Med. Microbiol - 9.
22. Massa S, Goffredo E, Altıerı C, et al. Fate of Escherichia coli O157:H7 in unpasteurized milk stored at 8 °C. Lett. Appl. Microbiol. -92.
23. Pıcozzı C, Foschıno R, Heuvelınk A, et al. Phenotypic and genotypic characterization of sorbitol-negative (suspected O157) Escherichia coli isolated milk samples in Lombardy region. Lett. Appl. 0LFURELRO -496. slow-fermenting
24. Abdul-Raouf UM, Ammar MS, Beuchat LR. Isolation of Escherichia coli O157:H7 from some Egyptian foods. Int. J. Food Microbiol -426.
25. Öksüz Ö, Arici M, Kurultay S, Gümüs T. Inci- dence of Escherichia coli O157 in raw milk and pickled cheese manifactured from raw PLON LQ 7XUNH\ )RRG &RQWURO - 456.
26. Gönül SA, Karapınar M. Escherichia coli patojenitesi ve gıdalardaki önemi. Tr. J. Bio- ORJ\ - 60.