Some Properties of Extracellular Bacillus Proteases and Optimisation of Enzyme Production (Turkish with English Abstract)

Öz

In this study, extracellular proteases of some Bacillus species were investigated. 12 Bacillus sp. were firstly tested with agar and broth media maximum total protease activities (TPA) were showed by B. cereus and S. subtilis and these bacteria were used for protease production 5 different broth media were prepared for this purpose. Among the media, maximum activities were obtained from a modification of FC broth medium. After 48 hours incubation time at 37 oC, TPA from B. cereus on FC broth medium was obtained about 600 U/ml at 9.0-10.0 pH range. At the same conditions, B. subtilis protease showed 525 U/ml activity at pH 7.0-8.0. Effects of various concentrations of ZnSO4 and EDTA on crude protease solutions were detected. The protease activity of B. subtilis was inhibited about 65% with 200 mM EDTA but this activity could be reactivated with 0.2 mM ZnSO4. These agent didn’t very much inhibit the protease activity of B. cereus. These results indicated that B. subtilis protease was a metalloprotease but B. cereus protease was not. The enzyme protein in crude enzyme solutions were partially recovered. B. cereus protease was isolated up to 49% and B. subtilis protease was isolated up to 47%.   

Anahtar Kelimeler

• -

Ekstraselüler Bacillus Proteazlarının Bazı Özellikleri ve Enzim Üretiminin Optimizasyonu

Öz

Bu araştırmada çeşitli gıda maddelerinden izole edilen Bacillussp.’lerin proteolitik özellikleri araştırılmıştır. 12 farklı Bacillussp.’nin bazı sıvı ve katı ortamlardaki toplam proteaz aktiviteleri (TPA) belirlenmiştir. Elde edilen sonuçlara göre en fazla TPA gösteren iki Bacillussp. seçilerek değişik bileşimlerdeki besi yerlerinde, enzim üretimleri için uygun koşullar araştırılmıştır. Katı besiyerinde en fazla TPA gösteren B. cereus ve B. subtilis’in denenen sıvı besiyerinde de en yüksek TPA’ları gösterdikleri belirlenmiştir. Enzim üretimi amacıyla 5 farklı sıvı besiyeri kullanılmış ve FC broth besiyerinin bir modifikasyonu ile 37 oC’de 48 saat inkübasyon sonunda B. cereus’ un pH 9.0-10.0 aralığında 600 U/ml, B. subtilis’in ise aynı koşullarda, ancak pH 7.0-9.0 aralığında 525 U/ml TPA gösterdikleri saptanmıştır. Seçilen 2 Bacillus sp.’nin ürettiği ekstraselüler proteazlarının özelliklerini belirlemek amacıyla, her iki bakteri proteazına çeşitli konsantrasyonlardaki etilendiamintetraasetik asit (EDTA) ve ZnSO4’ın etkileri incelenmiştir. Buna göre B. subtilis proteazını 200 m M EDTA, %65 oranında inhibe etmiş, ancak 0.2 mM ZnSO4 ile yeniden aktivasyon sağlanabilmiştir. B. cereus proteazı ise bu iki ajandan hemen hemen hiç etkilenmemiştir. Elde edilen bulgulardan, B. subtilis’in metalloproteaz, B. cereus’ un ise bir alkali proteaz ürettiği sonucuna varılmıştır. Bakteri proteazlarının izolasyon çalışmalarında B. cereus proteazı %49, B. subtilis proteazı ise %47 oranında geri kazanılabilmiştir.  

Anahtar Kelimeler

• -