Papatyadan (Matricaria chamomilla L.) Lipaz Enziminin Saflaştırılması ve Çeşitli Taşıyıcılara İmmobilize Edilmesi

In this study, lipase enzyme was firstly purified from chamomile (Matricaria chamomilla L.) which is abundant in Giresun (Turkey) and surroundings and the kinetic properties of the enzyme were investigated. 70 % of (NH4)2SO4 fraction of lipase esterase activity homogenate was obtained. After dialysis, this fraction was applied to DEAE-cellulose column, and lipase was purified 26 times. In the purification process, the protein amount was determined by using Lowry and E280/E260 Warburg methods while lipase esterase activtiy was assayed with Erlanson’s method. It was found that the purified enzyme, which obtained with SDS-PAGE electroforesis, had a molecular weight of 30 kDa. The optimum pH and temperature values were determined. It was found that the lipase purified from chamomile had an optimum pH value of 9 and an optimum temperature of 50 °C. When the affinity against different substrates of the enzyme was examined, the highest value was determined in p-nitrophenyl palmitate, with respectively Km and Vmax values being 0.2899 mM and 144.93 Units. Also, the lipase enzyme purified from chamomile was immobilized on various carriers by adsorption, covalent and ionic binding methods. The kinetic properties of the immobilized chamomile lipase such as optimum pH, optimum temperature were also studied.

Bu çalışmada, Giresun İli ve çevresinde bol miktarda yetişen papatyadan (Matricaria chamomilla L.) lipaz enzimi ilk defa saflaştırıldı ve kinetik özellikleri incelendi. Lipaz esteraz aktivitesi gösteren homojenizatın % 70’lik (NH₄)₂SO₄ kesiti elde edildi. Dializden sonra bu kesit DEAE-selüloz kolonlara uygulanarak lipaz enzimi 26 kat saflaştırıldı. Saflaştırma işlemlerinde protein miktarı Lowry ve E₂₈₀/E₂₆₀ Warburg yöntemlerine göre, lipaz esteraz aktivitesi ise Erlanson yöntemine göre tayin edildi. SDS-PAGE elektroforezi ile elde edilen saflaştırılmış enzimin molekül ağırlığının 30 kDa olduğu bulundu. Optimum pH ve sıcaklık değerleri belirlendi. Papatyadan saflaştırılan lipazın optimum pH’sının 9, optimum sıcaklığının 50 °C olduğu bulundu. Enzimin çeşitli substratlara karşı ilgisi incelendiğinde, lipazın ilgisinin en çok p-nitrofenil palmitatta olduğu ve bu substrata karşı K_m ve V_max değerlerinin sırasıyla 0,2899 mM ve 144,93 Ünite olduğu saptandı.Ayrıca, papatyadan saflaştırılan lipaz enzimi çeşitli taşıyıcılar  üzerine adsorpsiyon, kovalent ve iyonik bağlama yöntemleri ile immobilize edildi. İmmobilize edilmiş papatya lipazının optimum pH, optimum sıcaklık gibi kinetik özellikleri de incelendi.