Araştırma Makalesi
PDF Zotero Mendeley EndNote BibTex Kaynak Göster

Oryctolagus cuniculus Kimozin Enzimini Pichia pastoris Mayasında İfade Edecek Vektörün Dizayn ve Jenerasyonu

Yıl 2018, Cilt 3, Sayı 2, 26 - 34, 28.10.2018

Öz

Bu çalışmada rekombinant tavşan pro-kimozin genini üretmek amacıyla kullanılacak olan pPIC9K-Chy vektörünün dizayn edilmesi ve çoğaltılması hedeflenmektedir. DNA bilgi bankalarında biyoinformatik analizler yapılarak tavşan pro-kimozin gen dizilimi belirlenmiştir. Elde edilen dizilimlere göre dizayn edilen primerler ile tavşandan genomundan kimozin enzimi izole edilmiştir. Hedef DNA sekansları PIC9K vektörüne EcoRI ve NotI restriksiyon enzimleriyle üzerinden klonlanmıştır. Klonlama işlemi sonrasında hedef geni içeren vektör, JM109 kompetent E. coli hücrelerine ısı şoku uygulamasıyla transforme edilmiş ve antibiyotikli besiyerinde seçilimleri gerçekleştirilmiştir. Antibiyotik pozitif olan tek kolonilerin hedef geni taşıyıp taşımadıkları koloni PZR yöntemiyle doğrulanmış ve E. coli hücrelerinden plazmid DNA’lar ekstrakte edilmiştir. Elde edilen plazmid DNA' lar elektroporasyon yöntemi ile Pichia pastoris kompetent maya hücrelerine aktarılmış ve aktarılan hücreler çeşitli konsantrasyonlarda antibiyotik içeren besi yerlerine ekilerek hedef geni taşıdıkları doğrulanmıştır.

Kaynakça

  • [1].Flamm, E.L., ''How FDA approved chymosin: A case history'', Nature Biotechnology, 9: 349–351, 1991.[2]. Foltmann, B., Pedersen V. B., Jacobsen M., Auffman, D., Wijbrandt G., ''The complete amino acid sequence of prochymosin'', Proc. Nat. Acad. Sci., 74: 2321–4, 1977.[3]. Houen, G., Madsen, M.T., Harlow, K.W., Lønblad, P., Foltmann, B., ''The primary structure and enzymic properties of porcine prochymosin and chymosin'' Int J Biochem Cell Biology. 28(6):667-675, 1996.[4]. Mohanty, A. K., Mukhopadhyay, U. K., Kaushık, J. K., Grover, S., and Batısh, V. K., ''Isolation, purification and characterization of chymosin from riverine buffalo (Bubalus bubalis)'', Journal of Dairy Research, 70(01): 37- 43, 2003.[5]. Rogelj, I., Perko, B., Francky, A., Penca, V., and Pungerčar, J.,'' Recombinant lamb chymosin as an alternative coagulating enzyme in cheese production'', Journal of dairy science, 84(5): 1020-1026, 2001.[6]. Vega-Hernández, M. C., Gómez-Coello, A., Vıllar, J., and Claverıe-Martı́n, F., ''Molecular cloning and expression in yeast of caprine prochymosin'', Journal of biotechnology, 114(1): 69-79, 2004.[7]. Kappeler, S. R., Van Den Brink, H. J., Rahbek- Nielsen, M., Farah, Z., Puhan, Z., Hansen, E., Johansen, E., ''Characterization of recombinant camel chymosin reveals superior properties for the coagulation of bovine and camel milk'', Biochem. Biophys. Res. Commun, 342: 647−654, 2006.[8]. Rao, S., Dutta, S.M., ''Extraction of rennet from abomasum of suckling buffalo calves'', Ind J Dairy Sci., 34 (2): 235–237, 1981.[9]. Manıatıs, T., Frıtsch, E. F., and Sambrook, J., ''Molecular cloning''. A laboratory manual Cold Spring Harbor Laboratory, New York. 545, 1982.

Yıl 2018, Cilt 3, Sayı 2, 26 - 34, 28.10.2018

Öz

Kaynakça

  • [1].Flamm, E.L., ''How FDA approved chymosin: A case history'', Nature Biotechnology, 9: 349–351, 1991.[2]. Foltmann, B., Pedersen V. B., Jacobsen M., Auffman, D., Wijbrandt G., ''The complete amino acid sequence of prochymosin'', Proc. Nat. Acad. Sci., 74: 2321–4, 1977.[3]. Houen, G., Madsen, M.T., Harlow, K.W., Lønblad, P., Foltmann, B., ''The primary structure and enzymic properties of porcine prochymosin and chymosin'' Int J Biochem Cell Biology. 28(6):667-675, 1996.[4]. Mohanty, A. K., Mukhopadhyay, U. K., Kaushık, J. K., Grover, S., and Batısh, V. K., ''Isolation, purification and characterization of chymosin from riverine buffalo (Bubalus bubalis)'', Journal of Dairy Research, 70(01): 37- 43, 2003.[5]. Rogelj, I., Perko, B., Francky, A., Penca, V., and Pungerčar, J.,'' Recombinant lamb chymosin as an alternative coagulating enzyme in cheese production'', Journal of dairy science, 84(5): 1020-1026, 2001.[6]. Vega-Hernández, M. C., Gómez-Coello, A., Vıllar, J., and Claverıe-Martı́n, F., ''Molecular cloning and expression in yeast of caprine prochymosin'', Journal of biotechnology, 114(1): 69-79, 2004.[7]. Kappeler, S. R., Van Den Brink, H. J., Rahbek- Nielsen, M., Farah, Z., Puhan, Z., Hansen, E., Johansen, E., ''Characterization of recombinant camel chymosin reveals superior properties for the coagulation of bovine and camel milk'', Biochem. Biophys. Res. Commun, 342: 647−654, 2006.[8]. Rao, S., Dutta, S.M., ''Extraction of rennet from abomasum of suckling buffalo calves'', Ind J Dairy Sci., 34 (2): 235–237, 1981.[9]. Manıatıs, T., Frıtsch, E. F., and Sambrook, J., ''Molecular cloning''. A laboratory manual Cold Spring Harbor Laboratory, New York. 545, 1982.

Ayrıntılar

Birincil Dil Türkçe
Konular Mühendislik
Bölüm Makaleler
Yazarlar

SELİN ALİHANOĞLU Bu kişi benim (Sorumlu Yazar)
Harran Üniversitesi, Mühendislik Fakültesi, Gıda Mühendisliği Bölümü
Türkiye


Meral ATLI Bu kişi benim
Türkiye


Hasan VARDİN
Harran Üniversitesi, Mühendislik Fakültesi, Gıda Mühendisliği Bölümü
0000-0001-6552-2713
Türkiye


Mehmet KARAASLAN
Harran Üniversitesi, Mühendislik Fakültesi, Gıda Mühendisliği Bölümü
Türkiye

Yayımlanma Tarihi 28 Ekim 2018
Yayınlandığı Sayı Yıl 2018, Cilt 3, Sayı 2

Kaynak Göster

Bibtex @araştırma makalesi { humder394420, journal = {Harran Üniversitesi Mühendislik Dergisi}, issn = {}, eissn = {2528-8733}, address = {}, publisher = {Harran Üniversitesi}, year = {2018}, volume = {3}, pages = {26 - 34}, doi = {}, title = {Oryctolagus cuniculus Kimozin Enzimini Pichia pastoris Mayasında İfade Edecek Vektörün Dizayn ve Jenerasyonu}, key = {cite}, author = {Alihanoğlu, SELİN and Atlı, Meral and Vardin, Hasan and Karaaslan, Mehmet} }
APA Alihanoğlu, S. , Atlı, M. , Vardin, H. & Karaaslan, M. (2018). Oryctolagus cuniculus Kimozin Enzimini Pichia pastoris Mayasında İfade Edecek Vektörün Dizayn ve Jenerasyonu . Harran Üniversitesi Mühendislik Dergisi , 3 (2) , 26-34 . Retrieved from https://dergipark.org.tr/tr/pub/humder/issue/40431/394420
MLA Alihanoğlu, S. , Atlı, M. , Vardin, H. , Karaaslan, M. "Oryctolagus cuniculus Kimozin Enzimini Pichia pastoris Mayasında İfade Edecek Vektörün Dizayn ve Jenerasyonu" . Harran Üniversitesi Mühendislik Dergisi 3 (2018 ): 26-34 <https://dergipark.org.tr/tr/pub/humder/issue/40431/394420>
Chicago Alihanoğlu, S. , Atlı, M. , Vardin, H. , Karaaslan, M. "Oryctolagus cuniculus Kimozin Enzimini Pichia pastoris Mayasında İfade Edecek Vektörün Dizayn ve Jenerasyonu". Harran Üniversitesi Mühendislik Dergisi 3 (2018 ): 26-34
RIS TY - JOUR T1 - Oryctolagus cuniculus Kimozin Enzimini Pichia pastoris Mayasında İfade Edecek Vektörün Dizayn ve Jenerasyonu AU - SELİN Alihanoğlu , Meral Atlı , Hasan Vardin , Mehmet Karaaslan Y1 - 2018 PY - 2018 N1 - DO - T2 - Harran Üniversitesi Mühendislik Dergisi JF - Journal JO - JOR SP - 26 EP - 34 VL - 3 IS - 2 SN - -2528-8733 M3 - UR - Y2 - 2018 ER -
EndNote %0 Harran Üniversitesi Mühendislik Dergisi Oryctolagus cuniculus Kimozin Enzimini Pichia pastoris Mayasında İfade Edecek Vektörün Dizayn ve Jenerasyonu %A SELİN Alihanoğlu , Meral Atlı , Hasan Vardin , Mehmet Karaaslan %T Oryctolagus cuniculus Kimozin Enzimini Pichia pastoris Mayasında İfade Edecek Vektörün Dizayn ve Jenerasyonu %D 2018 %J Harran Üniversitesi Mühendislik Dergisi %P -2528-8733 %V 3 %N 2 %R %U
ISNAD Alihanoğlu, SELİN , Atlı, Meral , Vardin, Hasan , Karaaslan, Mehmet . "Oryctolagus cuniculus Kimozin Enzimini Pichia pastoris Mayasında İfade Edecek Vektörün Dizayn ve Jenerasyonu". Harran Üniversitesi Mühendislik Dergisi 3 / 2 (Ekim 2018): 26-34 .
AMA Alihanoğlu S. , Atlı M. , Vardin H. , Karaaslan M. Oryctolagus cuniculus Kimozin Enzimini Pichia pastoris Mayasında İfade Edecek Vektörün Dizayn ve Jenerasyonu. Harran Üniversitesi Mühendislik Dergisi. 2018; 3(2): 26-34.
Vancouver Alihanoğlu S. , Atlı M. , Vardin H. , Karaaslan M. Oryctolagus cuniculus Kimozin Enzimini Pichia pastoris Mayasında İfade Edecek Vektörün Dizayn ve Jenerasyonu. Harran Üniversitesi Mühendislik Dergisi. 2018; 3(2): 26-34.
IEEE S. Alihanoğlu , M. Atlı , H. Vardin ve M. Karaaslan , "Oryctolagus cuniculus Kimozin Enzimini Pichia pastoris Mayasında İfade Edecek Vektörün Dizayn ve Jenerasyonu", Harran Üniversitesi Mühendislik Dergisi, c. 3, sayı. 2, ss. 26-34, Eki. 2018